Лаборатория полимеразной цепной реакции

ПЦР-диагностика в настоящее время наиболее высокоточный метод диагностики различных инфекций, который основывается на исследовании генетического материала человека (ДНК и РНК).

Данный метод позволяет определить наличие возбудителя в биологическом материале даже при минимальном его содержании, а в некоторых случаях, выявляет даже единичные клетки вирусов или бактерий.

Исследования

Определение ДНК/РНК вирусных и бактериальных агентов методом ПЦР в режиме реального времени из цельной крови и сыворотки крови:

1. Вирус гепатита В (качественный);
2. Вирус гепатита С (количественный);
3. Вирус гепатита С (количественный);
4. Вирус гепатита С (генотипирование 1/2/3);
5. Вирус Эпштейна-Барр;
6. Цитомегаловирус;
7. Вирус простого герпеса 1-2;
8. Вирус простого герпеса 6.

Определение ДНК вирусных и бактериальных агентов методом ПЦР в режиме реального времени из эпителиальных клеток, ликвора, мочи и т.д.:

1. Вирус папилломы человека высокого онкогенного риска (16,18,31,33,35,39,45, 52, 56,58,59 типы) – генотипирование;
2. Вирус папилломы человека высокого онкогенного риска (16,18,31,33,35,39,45, 52,58,59,67 типы) – количественное определение вирусной нагрузки;
3. Вирус папилломы человека низкого онкогенного риска (6,11 типы) – качественный;
4. Трихомонада vaginalis;
5. Хламидия trachomatis;
6. Хламидия  pneumoniae;
7. Уреаплазма urealiticum;
8. Уреаплазма spiecies;
9. Микоплазма hominis;
10. Микоплазма genitalium;
11. Микоплазма pneumoniae;
12. Кандида albicans;
13. Токсоплазма gondii.

Материал для проведения ПЦР-диагностики

В зависимости от поставленной задачи, материалом для ПЦР-диагностики могут служить:

1. соскобы эпителиальных клеток (кожные покровы, слизистая уретры, цервикального канала, др.);
2. смывы с конъюнктивы и др.;
3. кровь, плазма, сыворотка, биологические жидкости (сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкости, др.);
4. моча, мокрота, слюна, слизь и другие биологические выделения;
5. биоптаты органов.

Подготовка пациентов к сдаче материала для ПЦР-диагностики

Достоверность результатов лабораторной диагностики зависит не только от опыта и профессионализма врача-лабораторной диагностики, возможностей данной лаборатории, но и от того, соблюдал ли пациент рекомендации врача, насколько правильной была его подготовка к проведению анализа.

При сдаче анализа методом ПЦР врачи рекомендуют соблюдать следующие инструкции:

Кровь: Сдача ПЦР анализа крови проводится натощак, т.е. необходимо ничего не есть, не пить и не жевать жвачку. Забор крови проводится из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в специальную вакуумную пробирку типа Vacutainer (крышка сиреневого цвета, в качестве консерванта — ЭДТА). Запрещается использовать другие вещества в качестве антикоагулянта. Пробирка закрывается пробкой и переворачивается несколько раз (для перемешивания с антикоагулянтом). Пробирку с кровью до исследования хранят в холодильнике при +4°С. Максимальный срок хранения: при исследовании на вирусные гепатиты до 2 суток, при исследовании на другие инфекции до 5 часов (при +4°С, или 1 мес. при -20°С).

Моча: Для анализа отбирается первая порция утренней мочи в количестве 10-50 мл в специальный флакон или пробирку без консервирующего раствора. Максимальный срок хранения отобранного материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Слюна: Перед забором слюны производится трехкратное полоскание полости рта физиологическим раствором. Забор слюны производится в одноразовые пробирки в количестве 3-5 мл. Материал необходимо отбирать непосредственно перед исследованием и немедленно доставлять в лабораторию. При невозможности быстрой доставки материал замораживают при -20°С. Последующая транспортировка осуществляется в замороженном виде (в термосе со льдом).

Мазок из ротоглотки: Мазок материала производится рабочей частью стерильного одноразового аппликатора с задней стенки глотки и крипт миндалин. После забора материала аппликатор помещают в стерильную одноразовую пробирку. Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Мокрота и плевральный выпот: Материал отбирают в специальные флаконы в количестве 5-10 мл. Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Биопсийный материал: Материал помещают в сухую одноразовую пробирку типа Eppendorf. Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Синовиальная жидкость: Забор материала производится одноразовым шприцом в количестве 1 мл. Отобранный материал помещают в сухую одноразовую пробирку типа Eppendorf. Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Забор материала для анализа на урогенитальные инфекции: За сутки до проведения анализа не жить половой жизнью. Не мочиться за 1-2 часа до забора материала. У женщин забор материала производится из трех различных точек: цервикальный канал, задний свод влагалища, уретра. При необходимости материал для исследования берется из генитальных язв (исследование на HSV-I/II, Haemophilusducrei). Забор производится универсальным зондом или ложкой Фолькмана.

Не допускается наличие в мазке крови или слизи. Если соскоб взят универсальным зондом, рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал, отрезается или обламывается и помещается в одноразовую пробирку типа Eppendorf с консервирующим раствором (транспортной средой). Если забор материала производится ложкой Фолькмана, рабочая часть инструмента споласкивается в консервирующем растворе (транспортной среде), содержащимся в одноразовой пробирке Eppendorf.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С. Забор материала у мужчин производится универсальным зондом или цитощеткой из уретры. Обычно перед процедурой уретру обрабатывают физраствором. При необходимости материал для исследования берется из генитальных язв.

В случае забора материала универсальным зондом, рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал, отрезается или обламывается и помещается в одноразовую пробирку Eppendorf с консервирующим раствором (транспортной средой). После взятия материала цитощеткой, она опускается в пробирку Eppendorf с консервирующим раствором (транспортной средой), несколько раз ротируется, а затем удаляется из пробирки. Не допускается наличие в мазке крови. Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при +4°С или 1 мес. при -20°С.

Сок предстательной железы после пальцевого массажа предстательной железы и в количестве 0,5-1,0 мл собирают в сухую пробирку типа Eppendorf. При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи (в которой содержится сок предстательной железы) в количестве 10 мл (правила забора мочи смотри выше).

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при +4°С или 1 мес. при -20°С. Сок предстательной железы после пальцевого массажа предстательной железы и в количестве 0,5-1,0 мл собирают в сухую пробирку типа Eppendorf. При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи (в которой содержится сок предстательной железы) в количестве 10 мл (правила забора мочи смотри выше). Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при +4°С или 1 мес. при -20°С.

Оборудование