Онкологическое отделение (вирусологии)

Иммуноферментный анализ (ИФА) - это лабораторный иммунологический метод, в основе которого лежит специфическая реакция антиген-антитело.

Суть этого лабораторного метода - выявление наличия специфических антител классов A, M, G (IgА, IgM, IgG) к антигенам различных возбудителей болезней.

1. Панель иммунологических маркеров вирусных и бактериальных агентов, определяемых методом

1. иммуноферментного анализа (полуавтоматический анализатор):
2. определение вируса гепатита В – HBs-антиген (скрининг);
3. определение вируса гепатита В (подтверждающий);
4. определение вируса гепатита В – антитела к HBs-антигену;
5. определение вируса гепатита С – антитела IgM; IgG (скрининг);
6. определение вируса гепатита С (подтверждающий);
7. определение вируса простого герпеса 1-2 типов – антитела IgM, IgG;
8. определение вируса простого герпеса 6 типа – антитела IgG;
9. определение цитомегаловируса – антитела IgG, антитела IgМ и IgG к предраннему белку (IEA);
10. определение вируса краснухи – антитела IgM, IgG;
11. исследования на клещевой боррелиоз – антитела IgM, IgG;
12. определение хеликобактер пилори – антитела к CagА-антигену, экспресс выявление антител;
13. определение хламидии трахоматис – антитела IgА, IgM, IgG;
14. определение хламидии пневмонии – антитела IgА, IgM, IgG;
15. определение микоплазмы пневмонии – антитела IgА, IgM, IgG;
16. паразитарные инвазии:
    • описторхис – антитела IgG;
    • трихинелла – антитела IgG;
    • токсокар – антитела IgG;
    • эхинококк – антитела IgG;
    • аскариды – антитела IgG.
17. инфекции, вызываемые простейшими:
    • токсоплазма – антитела IgM, IgG;
    • лямблии – суммарные антитела.

2. Панель исследования вирусных и бактериальных агентов, определяемых методом иммуноферментного анализа (ИФА) на автоматическом анализаторе Cobas e 411 (выполнение исследования в течение 1 часа)

1. определение вируса гепатита В – HBs-антиген;
2. определение вируса гепатита В – антитела к HBs-антигену (Anti- HBs);
3. определение вируса гепатита С – антитела к вирусу гепатита С (Anti -HCV);
4. цитомегаловирус Ig G;
5. вирус простого герпеса I типа Ig G;
6. вирус простого герпеса II типа Ig G;
7. вирус краснухи Ig M;
8. токсоплазма Ig G;
9. токсоплазма Ig M;
10. кальцитонин;
11. определение общей тироксинсвязывающей способности.

3. Панель исследований, определяемых методом иммуноферментного анализа (ИФА) на автоматическом анализаторе Chorus Trio (Diesse Diagnostica Senese S.p.A., Италия) (выполнение исследования в течение 2 часов)

1. IgA к протеогликанам клеточной стенки Saccaromyses cerevisiae (болезнь Крона);
2. IgG к протеогликанам клеточной стенки Saccaromyses cerevisiae (болезнь Крона);
3. IgG к антителам к печеночно-почечным микросомам (аутоиммунный гепатит тип 1) – LKM-1 в сыворотке человека;
4. антимитохондриальные антитела к антигену (IgG) М-2 – AMA-M2 в сыворотке человека (первичный билиарный цирроз);
5. определение антител Ig A, Ig G к хеликобактер пилори;  
6. Bordetella pertussis – коклюш (выявление суммарных антител);
7. выявление специфических антител к антигенам Chlamydophila pneumoniae класса IgG;
8. выявление специфических антител к антигенам Chlamydophila pneumoniae класса IgM;
9. выявление специфических антител к антигенам Mycoplasma pneumoniae класса IgM;
10. выявление специфических антител к антигенам IgG к Mycoplasma pneumoniae класса IgG.

Материал для проведения иммуноферментного анализа

Наиболее распространенным материалом для исследования служит сыворотка венозной крови пациента, взятая натощак. Материалом также могут служить:

• спинномозговая жидкость;
• околоплодные воды;
• содержимое стекловидного тела;
• слизь цервикального канала и уретры.

Подготовка пациентов к сдаче материала для иммуноферментного анализа

Забор крови производится натощак. Перед сдачей крови не нужно принимать никакие препараты. Специфическое лечение (антибактериальное, противовирусное, противопаразитарное и прочее) нужно прекратить не менее, чем за 2 недели до исследования.

Оборудование

Автоматический анализатор фирмы Roche Diagnostics “Cobas e411” (Германия)

Полуавтоматический иммуноферментный анализатор Tecan “Sunrise” (Австрия)

Автоматический анализатор Chorus Trio (Diesse Diagnostica Senese S.p.A., Италия)

ПЦР-диагностика в настоящее время наиболее высокоточный метод диагностики различных инфекций, который основывается на исследовании генетического материала человека (ДНК и РНК).

Данный метод позволяет определить наличие возбудителя в биологическом материале даже при минимальном его содержании, а в некоторых случаях, выявляет даже единичные клетки вирусов или бактерий.

Исследования

Определение ДНК/РНК вирусных и бактериальных агентов методом ПЦР в режиме реального времени из цельной крови и сыворотки крови:

1. Вирус гепатита В (качественный);
2. Вирус гепатита С (количественный);
3. Вирус гепатита С (количественный);
4. Вирус гепатита С (генотипирование 1/2/3);
5. Вирус Эпштейна-Барр;
6. Цитомегаловирус;
7. Вирус простого герпеса 1-2;
8. Вирус простого герпеса 6.

Определение ДНК вирусных и бактериальных агентов методом ПЦР в режиме реального времени из эпителиальных клеток, ликвора, мочи и т.д.:

1. Вирус папилломы человека высокого онкогенного риска (16,18,31,33,35,39,45, 52, 56,58,59 типы) – генотипирование;
2. Вирус папилломы человека высокого онкогенного риска (16,18,31,33,35,39,45, 52,58,59,67 типы) – количественное определение вирусной нагрузки;
3. Вирус папилломы человека низкого онкогенного риска (6,11 типы) – качественный;
4. Трихомонада vaginalis;
5. Хламидия trachomatis;
6. Хламидия  pneumoniae;
7. Уреаплазма urealiticum;
8. Уреаплазма spiecies;
9. Микоплазма hominis;
10. Микоплазма genitalium;
11. Микоплазма pneumoniae;
12. Кандида albicans;
13. Токсоплазма gondii.

Материал для проведения ПЦР-диагностики

В зависимости от поставленной задачи, материалом для ПЦР-диагностики могут служить:

1. соскобы эпителиальных клеток (кожные покровы, слизистая уретры, цервикального канала, др.);
2. смывы с конъюнктивы и др.;
3. кровь, плазма, сыворотка, биологические жидкости (сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкости, др.);
4. моча, мокрота, слюна, слизь и другие биологические выделения;
5. биоптаты органов.

Подготовка пациентов к сдаче материала для ПЦР-диагностики

Достоверность результатов лабораторной диагностики зависит не только от опыта и профессионализма врача-лабораторной диагностики, возможностей данной лаборатории, но и от того, соблюдал ли пациент рекомендации врача, насколько правильной была его подготовка к проведению анализа.

При сдаче анализа методом ПЦР врачи рекомендуют соблюдать следующие инструкции:

Кровь: Сдача ПЦР анализа крови проводится натощак, т.е. необходимо ничего не есть, не пить и не жевать жвачку. Забор крови проводится из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в специальную вакуумную пробирку типа Vacutainer (крышка сиреневого цвета, в качестве консерванта — ЭДТА). Запрещается использовать другие вещества в качестве антикоагулянта. Пробирка закрывается пробкой и переворачивается несколько раз (для перемешивания с антикоагулянтом). Пробирку с кровью до исследования хранят в холодильнике при +4°С. Максимальный срок хранения: при исследовании на вирусные гепатиты до 2 суток, при исследовании на другие инфекции до 5 часов (при +4°С, или 1 мес. при -20°С).

Моча: Для анализа отбирается первая порция утренней мочи в количестве 10-50 мл в специальный флакон или пробирку без консервирующего раствора. Максимальный срок хранения отобранного материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Слюна: Перед забором слюны производится трехкратное полоскание полости рта физиологическим раствором. Забор слюны производится в одноразовые пробирки в количестве 3-5 мл. Материал необходимо отбирать непосредственно перед исследованием и немедленно доставлять в лабораторию. При невозможности быстрой доставки материал замораживают при -20°С. Последующая транспортировка осуществляется в замороженном виде (в термосе со льдом).

Мазок из ротоглотки: Мазок материала производится рабочей частью стерильного одноразового аппликатора с задней стенки глотки и крипт миндалин. После забора материала аппликатор помещают в стерильную одноразовую пробирку. Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Мокрота и плевральный выпот: Материал отбирают в специальные флаконы в количестве 5-10 мл. Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Биопсийный материал: Материал помещают в сухую одноразовую пробирку типа Eppendorf. Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Синовиальная жидкость: Забор материала производится одноразовым шприцом в количестве 1 мл. Отобранный материал помещают в сухую одноразовую пробирку типа Eppendorf. Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Забор материала для анализа на урогенитальные инфекции: За сутки до проведения анализа не жить половой жизнью. Не мочиться за 1-2 часа до забора материала. У женщин забор материала производится из трех различных точек: цервикальный канал, задний свод влагалища, уретра. При необходимости материал для исследования берется из генитальных язв (исследование на HSV-I/II, Haemophilusducrei). Забор производится универсальным зондом или ложкой Фолькмана.

Не допускается наличие в мазке крови или слизи. Если соскоб взят универсальным зондом, рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал, отрезается или обламывается и помещается в одноразовую пробирку типа Eppendorf с консервирующим раствором (транспортной средой). Если забор материала производится ложкой Фолькмана, рабочая часть инструмента споласкивается в консервирующем растворе (транспортной среде), содержащимся в одноразовой пробирке Eppendorf.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С. Забор материала у мужчин производится универсальным зондом или цитощеткой из уретры. Обычно перед процедурой уретру обрабатывают физраствором. При необходимости материал для исследования берется из генитальных язв.

В случае забора материала универсальным зондом, рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал, отрезается или обламывается и помещается в одноразовую пробирку Eppendorf с консервирующим раствором (транспортной средой). После взятия материала цитощеткой, она опускается в пробирку Eppendorf с консервирующим раствором (транспортной средой), несколько раз ротируется, а затем удаляется из пробирки. Не допускается наличие в мазке крови. Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при +4°С или 1 мес. при -20°С.

Сок предстательной железы после пальцевого массажа предстательной железы и в количестве 0,5-1,0 мл собирают в сухую пробирку типа Eppendorf. При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи (в которой содержится сок предстательной железы) в количестве 10 мл (правила забора мочи смотри выше).

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при +4°С или 1 мес. при -20°С. Сок предстательной железы после пальцевого массажа предстательной железы и в количестве 0,5-1,0 мл собирают в сухую пробирку типа Eppendorf. При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи (в которой содержится сок предстательной железы) в количестве 10 мл (правила забора мочи смотри выше). Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при +4°С или 1 мес. при -20°С.

Оборудование

Станция гель-документирования BioRad “Gel Doc XR+” (США)

Амплификатор в режиме реального времени “Rotor-Gene” 3000 (Австралия)

Амплификатор в режиме реального времени “Rotor-Gene” 6000 Q (Австралия)

Амплификаторы в режиме реального времени BioRad “C1000 Touch Termal Cycler” (США)

Автоматическая станция пробоподготовки Abbott m2000rt (США)

Амплификатор в режиме реального времени Abbot RealTime High Risk HPV для качественного определения in vitro ДНК 14 генотипов высокого онкогенного риска вируса папилломы человека (типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 и 68) в клинических образцах (США)